Test ELISA zisťuje početné choroby, a preto si našiel široké uplatnenie v medicíne a ďalších. Test ELISA je však najznámejší pre svoju diagnózu boreliózy. Čo je test ELISA? Ako interpretovať výsledky? Aká je cena testu?
Obsah:
- Test ELISA - čo zistí? Uplatnenie testu ELISA
- Test ELISA - aký je test?
- Test ELISA a lymská borelióza - kedy vykonať?
- ELISA test - cena. Koľko stojí test ELISA?
- Test ELISA - výsledky. Môžu to byť falošné poplachy?
- Test ELISA - výsledky. Môžu byť falošne negatívne?
Test ELISA, t. J. Enzýmovo viazaný imunosorbentný test, je bežne používanou laboratórnou metódou, ktorá slúži okrem iného na: na kvantitatívnu detekciu protilátok v krvi.
Z tohto dôvodu sa test ELISA používal pri diagnostike bakteriálnych ochorení, ako je napríklad lymská borelióza.
Výhodou metódy ELISA je jej jednoduchosť a možnosť rýchlej implementácie ako aj vysoká citlivosť. Metóda ELISA sa vykonáva pomocou špeciálnych plastových doštičiek s jamkami naplnenými napríklad proteínmi borélií (antigénmi) a špecifickými monoklonálnymi protilátkami, ktoré sú určené na detekciu protilátok vo vzorke pacienta.
Test ELISA - čo zistí? Uplatnenie testu ELISA
Vysoká citlivosť a jednoduchosť metódy ELISA umožnila jej použitie pri diagnostike mnohých chorôb, ale je známa predovšetkým ako diagnostická metóda lymskej boreliózy.
V prípade diagnózy lymskej boreliózy tzv nepriama ELISA, ktorá umožňuje detekovať špecifické IgM alebo IgG v testovanom materiáli. Rovnakým spôsobom možno zistiť protilátky aj pri diagnostike:
- vírusové infekcie: herpes vírusy (herpes, herpes zoster, Epstein-Barr, cytomegalovírus), HIV, vírusy hepatitídy (HBV a HCV)
- infekcie prvokmi: toxoplazmóza, giardiáza
- autoimunitné ochorenia: celiakia (anti-tTG alebo anti-DPG protilátky), Hashimotova choroba (anti-TG a anti-TPO protilátky), zápalové ochorenia čriev (anti-ASCA a anti-ANCA protilátky)
- parazitárne choroby a alergie, pri ktorých sa zisťujú špecifické protilátky IgE. Ich zvýšená hladina môže naznačovať prítomnosť alergií, napríklad na peľ a potraviny, alebo parazitické napadnutie (pásomnica ozbrojená, škrkavka ľudská)
Existujú aj úpravy metódy ELISA (tzv. Sendvičová ELISA), ktoré umožňujú detekciu vzorky iných proteínov ako protilátok. Potom je cieľom testu zistiť v biologickom materiáli:
- fragmenty vírusov alebo baktérií, najčastejšie ide o antigény charakteristické pre daný patogén
- sérové hormóny, napríklad estrogén, prolaktín, TSH, fT4, kortizol
- enzýmy, napríklad kalprotektín, pankreatická elastáza, alkalická fosfatáza
- nádorové markery, napríklad CA-125
- prítomnosť liekov v sére
Táto metóda je použiteľná aj v potravinárskom priemysle, kde dokáže zistiť stopové množstvá alergénov (napr. Mlieko, arašidy), GMO alebo toxínov v potravinách.
Test ELISA - o čo ide?
Diagnóza napríklad lymskej boreliózy metódou ELISA spočíva v detekcii imunitných proteínov v biologickom materiáli - protilátkach, ktoré vznikajú pri reakcii na antigény borélií.
Protilátky sa testujú v dvoch triedach, IgM a IgG. IgM sú prvé protilátky, ktoré sa objavia v tele pri kontakte s baktériami a časom sa znižujú.
Ich miesto zaujímajú perzistentnejšie IgG protilátky, ktoré môžu zostať v tele niekoľko desiatok rokov.
Týmto spôsobom sa nepriamo testuje prítomnosť baktérií v tele detekciou protilátok špecificky namierených proti spirochétom Borrelia.
Protilátky v rôznych štádiách infekcie môžu byť namierené proti rôznym proteínom borélie. Napríklad v počiatočnom štádiu je to proteín p41.
V neskorších štádiách sa začína objavovať čoraz viac bielkovín, ako napríklad p21, p30, p39, p43. To je dôvod, prečo je diagnostika boreliózy mimoriadne ťažká.
Výber bakteriálnych proteínov je mimoriadne dôležitý, aby mal test vysokú diagnostickú hodnotu. Preto by sa pri diagnostike lymskej choroby mali bežne používať testy ELISA II. Alebo III. Generácie, pri ktorých sa vyberajú sady proteínov na získanie najspoľahlivejšieho výsledku.
Test ELISA a borelióza. Kedy urobiť?
Lymská borelióza je bakteriálne ochorenie spôsobené baktériami Borrelia burgdorferi a ich mnohými odrodami.
Diagnóza ochorenia nie je ľahká kvôli zložitosti imunitnej odpovede proti boréliám a nedokonalosti laboratórnych metód.
Najbežnejšie používanou laboratórnou metódou je vysoko citlivá metóda ELISA, ktorá detekuje špecifické protilátky vytvorené proti bakteriálnym proteínom.
Pri diagnostike lymskej boreliózy sa používa nepriama metóda ELISA, pri ktorej sa rozlišujú nasledujúce fázy:
- inkubácia jamiek na platni s materiálom zhromaždeným od pacienta, napríklad sérom. Pokiaľ sú v testovanom materiáli protilátky proti boréliám, viažu sa na proteíny v spodnej časti reakcie dobre
- potom sa prebytočné sérum vypláchne špeciálnou premývacou tekutinou (pufrom) a tzv konjugát, to znamená protilátka naviazaná na enzým, ktorý sa viaže na predtým naviazané protilátky v reakčných jamkách
- potom sa pridá substrát pre konjugát a uskutoční sa farebná reakcia (pozitívny výsledok) alebo žiadna farebná reakcia (negatívny výsledok)
- posledným krokom je odčítanie koncentrácie protilátok proti boréliám v sére pacienta čitateľom (spektrofotometer)
Test ELISA na lymskú boreliózu sa vykonáva z krvi a v prípade neurologických symptómov (neuroboreliózy) aj z mozgovomiechového moku.
Synoviálna tekutina by sa nemala testovať, pretože existuje vysoká pravdepodobnosť falošne pozitívnych výsledkov.
Základom pre diagnostiku ochorenia sú klinické príznaky, ktoré ho poukazujú, potvrdené výsledkami laboratórnych testov.
Pridanie výsledku laboratórneho testu bez príznakov neautorizuje diagnózu boreliózy, pretože sa preukázalo, že protilátky proti boréliám sa zisťujú aj u zdravých ľudí.
Sérologická diagnostika lymskej boreliózy sa začína semikvantitatívnym skríningovým testom ELISA. Ak je výsledok negatívny, znamená to, že neboli zistené žiadne spirochéty borélie alebo je výsledok falošne negatívny.
Ak je výsledok pozitívny alebo slabo pozitívny (nejednoznačný), malo by sa vykonať potvrdzujúce testovanie Western blot, ktoré sa vyznačuje vysokou špecifickosťou.
Týmto sa potvrdzuje „pravdivosť“ výsledkov získaných metódou ELISA. Počas diagnostiky nemôžete preskočiť žiadny z vyššie uvedených krokov a napríklad okamžite vykonať diagnostiku pomocou metódy Western blot alebo vykonať diagnostiku iba na základe pozitívneho výsledku testu ELISA.
V Poľsku sa diagnóza boreliózy veľmi často končí v prvom štádiu skríningu, čo vedie k nesprávnej interpretácii pozitívnych alebo slabo pozitívnych výsledkov.
Odporúčaný článok:
Test transformácie lymfocytov (LTT) Je dobré vedieťELISA test - cena. Koľko stojí test ELISA?
Cena testu je približne 60 PLN a je vykonaný okamžite. Na výsledky postúpenia však môžete počkať asi tri mesiace.
Test ELISA - výsledky. Môžu to byť falošné poplachy?
Falošné pozitívne výsledky sú výsledkom skríženej reaktivity protilátok IgM s inými proteínmi. Protilátky produkované organizmom môžu „nesprávne“ rozpoznávať antigén z iných mikroorganizmov ako antigén borélie.
Najčastejšie „chyby“ sa vyskytujú u ľudí infikovaných treponémou pallidum, herpesvírusmi a u ľudí so systémovým lupus erythematosus a inými reumatickými ochoreniami.
Test ELISA - výsledky. Môžu byť falošne negatívne?
Falošne negatívne výsledky sa môžu objaviť v počiatočnom štádiu infekcie, potom by sa mal test opakovať asi po 3 - 4 týždňoch. Toto sa volá sérologické okno, to je počiatočné obdobie infekcie, v ktorom si telo ešte „nestihlo“ vyrobiť špecifické protilátky.
To isté platí pre ľudí s imunodeficienciou, ktorí si neprodukujú dostatok protilátok.
Veľkým problémom, najmä pri veľmi intenzívnych infekciách, je výskyt tzv imunitné komplexy, ktoré pozostávajú z antigénov borélie a špecifických protilátok proti nim.
Výsledkom je, že protilátky sa stávajú „neviditeľnými“ pre bežne používané metódy, ako je ELISA, a hoci sú prítomné v testovanom materiáli, nemožno ich detekovať.
V takýchto prípadoch môže laboratórium použiť odbúravanie imunitných komplexov. Toto ošetrenie je určené na uvoľnenie protilátok. Táto metóda sa však príliš nepoužíva kvôli chýbajúcej štandardizácii v laboratóriách.
Mali by ste vedieťPrečo nie je diagnóza boreliózy ľahká?
Je to z dôvodu zložitosti imunitnej odpovede proti boréliám a obmedzenia laboratórnych metód. Rozmanitosť odrôd a výskyt nových, ktoré spôsobujú infekcie, najmä na európskom kontinente, neumožňujú vývoj účinných diagnostických metód.
V Európe sa nedávno objavilo viac odrôd, napríklad Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana a Borrelia spielmanii. Okrem toho sa spirochéty borélie v tele môžu zmeniť na cysty alebo zostať na miestach tela neprístupných pre bunky imunitného systému.
Byť takto „neviditeľný“ pre imunitný systém. Ďalej sa ukázalo, že tkanivá môžu obsahovať fragmenty baktérií, ktoré majú silne prozápalové vlastnosti. Predpokladá sa, že sú zodpovedné za chronické príznaky lymskej boreliózy napriek negatívnym výsledkom laboratórnych testov.
Literatúra
1. Witecka-Knysz E. a kol. Lymská borelióza: prečo je diagnostika taká ťažká? Laboratórny diagnostik, apríl 2007.
2. Moore A. a kol., Súčasné pokyny, spoločné klinické úskalia a ďalšie pokyny pre laboratórnu diagnostiku lymskej boreliózy, USA. Emerg Infect Dis. 2016 Júl; 22 (7).
3. Laboratórna diagnostika chorôb prenášaných kliešťami. Odporúčania pracovnej skupiny: Národná komora laboratórnych diagnostikov, Národný ústav verejného zdravotníctva - Národný ústav hygieny, Národný konzultant v oblasti infekčných chorôb, Ústav infekčných chorôb a neuroinfekcií, Lekárska univerzita v Białystoku, Poľská virologická spoločnosť, Varšava 2014
4. Hosseini S. a kol .: Enzym-linked Immunosorbent Assay (ELISA) od A do Z. Springer 2017.
